国产午夜视频_在线观看三区_91视频大全_国产精品久久久久国产a级_99精品欧美一区二区三区综合在线_国产精品资源在线

歡迎光臨上海懋康生物科技有限公司
主頁 > 技術文章 > 一起來了解一下什么是金擔子素A
技術文章
一起來了解一下什么是金擔子素A
   金擔子素A(Aureobasidin A,AbA)是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環酯肽類抗生素,具有很強的抗真菌能力。在較低的濃度下(0.1-0.5 μg/ml)即可對酵母產生毒性。對其敏感的真菌種類包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、構巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用機制在于AbA抑制了真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干擾鞘脂合成,從而進一步殺死菌株。編碼IPC合成酶的基因研究較多的有來自釀酒酵母菌的AUR1 基因,以及構巢曲霉的AURA基因,兩者具有同源性。通過對這些編碼基因進行突變即可使得菌株對AbA產生抗性,如AUR1-C基因。

  AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標記。AbA抗性也是酵母單/雙雜交研究中理想的報告子。本品為溶于甲醇的AbA溶液,濃度為1 mg/ml。具體的工作濃度取決于宿主細胞的敏感度(見表1. AbA對各種酵母菌的低抑菌濃度(MIC))。

  金擔子素A的操作步驟(抗AbA的酵母轉化系統)

  1)加入0.5 ml過夜培養的酵母到50 ml YPD培養基中(配方:1L液體培養基含有10g yeast extract,20g polypeptone, 20g D-glucose;固體培養基另外加入2%瓊脂;)。

  2)30℃培養約6小時,測定OD660為1~2。使用二倍體時,測定OD660為2~4。

  3)1,000×g離心5分鐘。

  4)用10 ml Solution A(配方:100 mM Lithium acetate,10 mM Tris-HCl pH 7.5,1 mM EDTA)懸浮沉淀,1,000×g離心5分鐘。

  5)用Solution A重懸沉淀,直到OD660為150。

  6)在管內分取100 µl細胞懸浮液,30℃培養1小時。

  7)加入5 µg載體(環狀或線性DNA)和150 µg Carrier DNA,100℃加熱10分鐘,迅速冷卻。

  注:pAUR101需使用線性DNA進行轉化。使用環狀DNA會降低轉化效率甚至轉化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的質粒DNA進行轉化。

  8)加入850 µl Solution B(配方:取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解,需要現用現配),輕輕混勻。

  9)30℃培養30分鐘后,42℃培養15分鐘。

  10)室溫放置10分鐘。

  11)5,000 rpm離心1分鐘,用5 ml YPD培養基懸浮沉淀。

  12)30℃培養6小時~過夜。

  13)5,000~10,000 rpm離心,用1-10 ml 0.9% NaCl懸浮沉淀。

  14)在YPD選擇培養基平板(含有一定濃度的AbA,依菌株類型而定)上接種100 µl細胞懸液。30℃培養3-4天后轉化完成。

  15)挑取陽性轉化子,和/或測定轉化效率(以每微克質粒DNA轉化的菌落數來表示)。

  • © 2019 上海懋康生物科技有限公司 版權所有 技術支持:環保在線
  • 電 話:18616957973 傳 真:86-021-54736159 QQ號碼:1563822900 郵 箱:2971634497@qq.com 地 址:上海市閔行區虹梅南路2588號綠亮科創園1幢A棟321室
  • 備案號:滬ICP備16016464號-3 總訪問量:599901
在線客服 聯系方式

服務熱線

18616957973

主站蜘蛛池模板: 国产成人免费 | 国产在线观看一区二区三区 | 精品99久久久久久 | 国产精品久久毛片 | 亚洲系列第一页 | 日韩成人在线免费观看 | 2021最新热播中文字幕-第1页-看片视频 亚洲第一男人天堂 | 国产伦精品一区二区三区在线 | 久久久久久久久久久久久久久久久久久久 | 日本黄色一区二区 | 欧美综合一区二区 | 欧洲一级视频 | 一区二区三区国产亚洲网站 | 国产精品久久久久国产a级 一级免费黄色 | 久久久网址 | 国产精品久久久久久久久久久久 | 精品国产91乱码一区二区三区 | 亚洲无线视频 | 麻豆亚洲| 久久精品欧美一区二区三区不卡 | 国产在线观看欧美 | 香蕉91| 三级电影网址 | www.久久久.com| 日韩精品一区二区三区老鸭窝 | 久草在线在线精品观看 | 伊人免费在线观看高清版 | 四虎8848在线精品观看 | 日本一区二区三区在线播放 | a在线观看 | 国产精品二区一区二区aⅴ污介绍 | 日韩精品在线视频 | 国产高清一区 | 久久精美视频 | 久久99国产精一区二区三区 | 亚洲视频a | 久草网站 | 亚洲午夜精品一区二区三区他趣 | 欧美一区二区三区视频 | 成人不卡 | 亚洲 欧美 在线 一区 |